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上世紀40年代，Draize試驗在化妝品眼刺激性毒理評價方面發(fā)揮了重要作用，而后隨著動物保護運動的開展、動物實驗的“3R”原則的提出以及法規(guī)的日益重視，易操作、具有科學(xué)性的動物替代實驗也廣受歡迎。根據(jù)《化妝品功效宣稱評價規(guī)范》，宣稱溫和（無刺激）可以通過實驗室試驗、消費者使用測試、人體功效評價試驗等方式，可以同時結(jié)合文獻資料或研究數(shù)據(jù)分析結(jié)果，進行功效宣稱評價。

其中實驗室試驗有多個不同模型的測試方法，比如：

①雞胚模型，可進行雞胚絨毛尿囊膜試驗（HET-CAM）、雞胚絨毛尿囊膜血管試驗（CAMVA）、雞胚尿囊膜臺盼藍染色試驗 （TBS-CAM）；

②體外組織模型，較為常用的有牛角膜渾濁和滲透性試驗、重建人體表皮模型體外測試；

③細胞模型，相關(guān)實驗有短時間暴露試驗（角膜細胞試驗）、熒光素漏出試驗、紅細胞溶血試驗等。

其中，短時間暴露試驗（角膜細胞試驗）在2015年通過驗證，并且是被經(jīng)濟合作與發(fā)展組織采納的眼刺激性替代方法。今天小編帶大家了解一下角膜細胞試驗。

角膜細胞試驗即使用細胞作為模型的實驗室試驗中的短時間暴露試驗。其采用的模型是SIRC細胞，是家兔眼角膜的上皮纖維細胞。實驗原理是化學(xué)物中的毒性物質(zhì)引起的角膜上皮損傷以及刺激反應(yīng)類似于細胞毒性對細胞的損傷作用。通過將化妝品原料、化學(xué)品在短時間內(nèi)直接作用于SIRC細胞上，反應(yīng)時間5min，最后通過計算細胞的相對存活率來評估受試物的刺激性。

關(guān)于角膜細胞試驗的方法有兩種，分別來自：

①《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2022的征求意見稿，第六章。

② SN/T 3084.2-2014進出口化妝品眼刺激性試驗 第2部分：角膜細胞試驗方法。

方法有所不同，相應(yīng)的評判標準也有所不同。

①、在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2022的征求意見稿中：

在稀釋受試物時，一個受試物同時稀釋到5%和0.05%兩個濃度，溶劑為生理鹽水，作用5min后，使用MTT法或者CCK-8法測定細胞的吸光度，計算出相應(yīng)的細胞存活率。判斷標準：

②、根據(jù)行業(yè)標準SN/T3084.2-2014進出口化妝品眼刺激性試驗第2部分：角膜細胞試驗方法，在稀釋受試物時，統(tǒng)一稀釋到0.5%，溶劑使用PBS，作用5min后，使用MTT法或者CCK-8法測定細胞的吸光度，計算出相應(yīng)的細胞存活率。當(dāng)這一次實驗出現(xiàn)細胞存活率≤70%的情況，需要開始第二輪試驗，受試物濃度不變與上一次實驗相同，溶劑改用DMEM完全培養(yǎng)基，同樣方法測試，最后計算相對細胞存活率。判斷標準：

隨著“3R”原則被越來越多人所認知以及動物實驗替代技術(shù)的成熟，體外動物替代實驗已是化妝品安全性評價發(fā)展的必然趨勢。相比動物實驗，角膜細胞試驗具有經(jīng)濟成本低、方法容易掌握、毒性終點易于測定、重復(fù)性好、靈敏度高、方法易標準化、材料容易獲取等優(yōu)點，是更適合化妝品企業(yè)內(nèi)部開展的“溫和（無刺激）”宣稱的實驗室測試方法。

復(fù)制